Strep-Tag II蛋白纯化磁珠（Beads Magrose Strep-Tactin）

货号：M2350

规格：5 mL

保存：2-8℃，保质期 2 年

产品内容：

Strep-Tag 系统是模拟链霉亲和素-生物素系统的新型蛋白纯化系统，Strep-Tactin 对 Strep-Tag II 的亲和能力与链霉亲和素相比，至少强 10 倍以上，且分离纯化条件温和，在生理条件下即可实现蛋白的分离纯化；此外，与其他 tag 相比，Strep-Tag II 为 8 个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），由于标签小，仅为1 kDa左右，不影响融合后蛋白质的结构和功能。这些温和的纯化参数能保存蛋白质的生物活性， 并仅经一步提取即可产出超过 99%的纯度。Beads Magrose Strep-Tactin 磁珠采用特殊的蛋白偶联工艺，将 Strep-Tactin 蛋白共价偶联到超顺磁性磁珠表面，制备了一种专为高效、快速分离纯化Strep-tag II 蛋白的一种新型功能化材料，实现并搭建了提取速度、提取量及纯度兼得的蛋白纯化平台。

产品特性：

注意：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅做参考值。

适用范围：

可用于从任何表达系统，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中含有 Strep-Tag II 标签蛋白的分离纯化。

操作步骤：

目标蛋白与磁珠的结合性能将直接影响目标蛋白的纯化效率，各种缓冲液配制也将在一定程度上影响目标蛋白的回收率和纯度。以下提供一个较为广泛应用的Strep-Tag II 蛋白的纯化流程，用户可参考该操作流程，或者根据自己蛋白的特性自行设计和优化蛋白纯化流程。

1、缓冲溶液配制

Binding/Washing Buffer ：10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH：8.0

  Elution Buffer：2.5 mM desthiobiotin in Binding Buffer。

2、样品处理

(1) 大肠杆菌、酵母等细胞内表达蛋白：表达细胞用适量 Binding Buffer 稀释，加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为 1 mM 的 PMSF）；冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品。如果样品过于粘稠，可根据需要在粗样品中加入适量核酸酶，在冰上放置 30 min，以降解核酸。另外，如果目标蛋白含量较低，建议将粗蛋白样品进行离心操作。

(2) 胞外表达蛋白：取胞外表达上清，用等量Binding Buffer 稀释平衡，即为粗蛋白样品。

(3) 动物细胞胞内表达蛋白：取适量动物细胞，用适量 PBS 洗涤 1 次，弃上清；用适量含 1%（v/v） Triton X-100 或 1%（v/v）NP-40 的 Binding Buffer 重悬；加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为 1 mM 的PMSF）；置于冰上 10 min，即为粗蛋白样品。

3、磁珠预处理

一般情况下，磁珠的使用量是由用户根据目标蛋白产量和磁珠载量信息计算获得。例如：采用大肠杆菌表达某目标蛋白，250 mL 发酵液收获 1 g 湿重的菌体，通过预实验估算其目标蛋白产量为~7 mg，用户需要取 10 mL 10%的磁珠悬液用于目标蛋白的纯化。以下即以此为例进行详细说明：

(1) 将磁珠产品置于漩涡混匀器上充分混匀，用移液器取 10 mL 磁珠悬液于离心管中；

(2) 将离心管置于磁性分离器上，待溶液变澄清后，移去上清液；

(3) 加入 5~10 mL Binding Buffer/Washing Buffer 到上述装有磁珠的离心管中，盖紧盖子，漩涡振荡 15 s，使磁珠重新悬浮。将离心管置于磁性分离器上，磁性分离*，移去上清液，重复洗涤 2 次。

*注：在磁性分离过程中，为了减少磁珠在使用过程中的损耗，待溶液变澄清后，盖紧离心管盖子，保持离心管仍在磁性分离器上，手持磁性分离器与离心管上下翻转数次，使澄清的溶液涮洗离心管盖上残留的磁珠，静置片刻，使溶液重新变澄清；以下同。

4、目标蛋白与磁珠结合

(1) 用 10 mL Binding Buffer 重悬 1 g 湿重的菌体，进行破碎和裂解后，即为粗蛋白样品；

(2) 将粗蛋白样品转移到装有已预处理磁珠的离心管中，盖紧离心管盖；

(3) 将离心管置于漩涡混匀器振荡 15 s，然后将其置于垂直混合仪上，室温垂直混匀 30 min（如果需要，可在 2~8℃的低温环境下旋转混合约 1 h，防止目标蛋白降解）；

(4) 将离心管置于磁性分离器上进行磁性分离，移出上清液到新的离心管中以备后续检测。从磁性分离器上取下离心管进行下一步洗涤步骤。

5、磁珠洗涤

(1) 将步骤 4 的磁珠中加入 5~10 mL Washing Buffer，漩涡混合 2 min，磁性分离，移出清洗液到新的离心管中，以备取样检测；

(2) 继续将上述磁珠中加入 5~10 mL Washing Buffer，漩涡混合 2 min，使磁珠重新悬浮，将磁珠悬液转移至新的离心管，避免原离心管壁上非特异性吸附蛋白污染目标蛋白；磁性分离，移出上清液到收集管，以备取样检测；

6、目标蛋白洗脱

(1) 加入 2~5 mL Elution Buffer（用户可根据需要改变洗脱体积调整目标蛋白浓度）于离心管中，盖紧离心管盖，然后将离心管置于垂直混合仪上，室温垂直混合洗脱 10 min；磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标蛋白样品；

(2) 如果需要，可以重复上述步骤 1 次，收集样品到新的离心管中，以检测目标蛋白是否洗脱完全。

7、磁珠再生和保存

(1) NaOH 再生：洗脱目的蛋白后的磁珠按照以下顺序进行洗涤： 5~10 mL 纯化水洗涤 3 次、5~10 mL 0.5M NaOH 洗涤 3 次、5~10 mL 纯化水洗涤至中性，最后加入 10 mL 保存液，将磁珠放置2~8℃环境保存。

(2) HABA 再生：用脱硫生物素洗脱目标蛋白的磁珠还可以用 HABA 缓冲液再生，加入 5~10 mL 1mM HABA 洗涤磁珠 5 次，接着用 Binding Buffer 洗涤磁珠至磁珠本身颜色，每次洗涤 5 min， 最后加入 10 mL 保存液，将磁珠放置 2~8°C 环境保存。

蛋白纯化流程的优化

以上操作流程适用于大部分 Strep-Tag II 标签蛋白的纯化，根据目标蛋白与 Strep-Tactin 蛋白纯化磁珠的结合性能不同，用户可以从以下几个方面对纯化流程进行优化，以提高目标蛋白的回收率和纯度。

提高目标蛋白回收率的参考方法：

(1) 延长蛋白溶液与磁珠孵育的时间；

(2) 添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；

(3) 增加磁珠用量；

(4) 延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数；

提高目标蛋白纯度的参考方法：

(1) 在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；

(2) 延长洗涤的时间，增加洗涤次数；

注意事项

(1) 首次使用本产品前，请务必详细阅读本用户手册；

(2) 磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作；

(3)